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abcam抗體的修復(fù)和純化方法介紹
更新時(shí)間:2016-12-09   點(diǎn)擊次數(shù):2426次
   abcam抗體的修復(fù)方法

  1、沸水浴修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境,保持外部沸騰狀態(tài)15min,自然冷卻至室溫;

  2、微波修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中,高火5min,?;?min,中火5min,自然冷卻至室溫。

  abcam抗體的純化方法

  多克隆抗血清或單克隆腹水/組織培養(yǎng)上清通常通過(guò)下述三種方法中的一種來(lái)進(jìn)行純化:

  1.蛋白 A/G 純化

  蛋白 A/G 純化是應(yīng)用金黃色葡萄球菌的蛋白 A 或鏈球菌的蛋白 G 對(duì)免疫球蛋白 Fc 段的高親和性。蛋白 A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白,但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋白組分。結(jié)果蛋白 A/G 純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應(yīng)性。

  2.親和純化

  親和純化是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基之間的一種可逆的相互作用。

  抗原親和純化是利用免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結(jié)合的特點(diǎn),消除了大量的非特異免疫球蛋白成分,把與目標(biāo)抗原特異結(jié)合的免疫求蛋白富集。因此親和純化后獲得的主要是含目標(biāo)特異性免疫球蛋白。

  3.前吸收

  多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)前吸收。也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸收,以消除可能的交叉反應(yīng)的抗體。這樣純化后的抗體純度和特異性都很高,任何交叉反應(yīng)都被顯著減少。

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