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堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)
更新時間:2016-06-17   點擊次數(shù):2081次

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)

產(chǎn)品簡介:

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱ALPAKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi),其活性所需zui適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法),其原理是在pH9.29.8的堿性條件下,細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸不萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有產(chǎn)物,定位于細胞質(zhì)中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

產(chǎn)品組成

編號

名稱

D2804

4×2ml

D2804

4×10ml

D2804

4×20ml

Storage

試劑(A):ALP固定液

2ml

10ml

20ml

RT避光

試劑(B):

ALP孵育液

B1:AS-BI染色液

1ml

5ml

10ml

-20℃避光

B2:FBB染色液

1ml

5ml

10ml

-20℃避光

臨用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即為 ALP 孵育液,即配即用。

試劑(C):核固紅染色液

2ml

10ml

20ml

4℃避光

試劑(D):甲基綠染色液

2ml

10ml

20ml

RT避光

使用說明書

1

 

自備材料:

1、載玻片、濕盒

2、顯微鏡

 

操作步驟(僅供參考)

()、涂片或切片

1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。

2、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中,避光孵育15~20min,水洗。

3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3~5min。

4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。

()貼壁培養(yǎng)細胞

1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細胞,棄液,PBS清洗干凈。

2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中,避光孵育15~20min,PBS清洗。

4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3~5min。

5、PBS 清洗、鏡檢。

染色結(jié)果:

ALP活性部位

藍色

細胞核

紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)

血液、骨髓涂片結(jié)果判斷:

一般以積分報告結(jié)果,根據(jù) 100 個中性粒細胞陽性顆粒進行 0~4+計分。

細胞分值

染色特點

0

無顆粒

1

稍有顆粒

2

中等程度顆粒

3

多數(shù)顆粒

4

充滿顆粒

 

臨床意義:

1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高,未經(jīng)治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。

2、急性細菌感染積分明顯增高,病毒感染積分多正?;驕p低。

3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS積分常減低。

 

注意事項:

1、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。

2、培養(yǎng)細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細胞。

3、ALP孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。

4、復染時,核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。

5、每次染色時,應(yīng)有陽性對照片。

 

有效期:6個月有效。

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